Coloração de Gram

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Aula de Microbiologia trouxe a questão da coloração de Gram, onde tenha-se o nome devido ao criador; cientista Hans Christian Gram, espero que ajude.

A técnica de coloração de Gram é uma técnica de coloração diferencial que permite distinguir os dois principais grupos de bactérias por microscopia óptica( gram positivo; gram negativo).

História:

Foi descoberta pelo físico dinamarquês Hans Christian Gram em 1884. Este cientista obteve com a coloração realizada uma melhor visualização das bactérias em amostras de material infectado. Verificou, no entanto, que nem todas as bactérias coravam com este método o que o levou a sugerir a possibilidade de ser usado um contrastante. Gram morreu em 1935 sem ter conseguido que fosse reconhecida a devida importância ao seu método de coloração. Atualmente, esta técnica é fundamental para a taxonomia e identificação das bactérias, sendo utilizada como técnica de rotina em laboratórios de bacteriologia.

A técnica de coloração de Gram consiste em expor as células bacterianas à seguinte sequência:

1° Passo: Corante primário – violeta de cristal: cora o citoplasma de púrpura, independentemente do tipo de célula.
2° Passo: Mordente – solução de iodo: aumenta a afinidade entre o violeta de cristal e a célula e forma com o corante um complexo insolúvel dentro da célula.
3° Passo: Agente descolorante – solvente lipídico: álcool, acetona ou ambos.
4° Passo: Contrastante – safranina ou fucsina básica: cora o citoplasma de vermelho

Composição;Valores de Referência:

Cistal-Violeta: Cristal Violeta: 10,0 g/L; Álcool Etílico Absoluto: 100,0mL/L; Oxalato de Amônio: 8,0g/L.
Lugol para Gram: Lugol forte: 0,333mL/L.
Álcool-Acetona: Acetona P.A.: 300,0 mL/L; Álcool Etílico Absoluto: 700,0mL/L.
Fucsina Fenicada de Gram: Fucsina Fenicada de Ziehl Nelseen: 100,0 mL/L.

Leitura e Interpretação dos Resultados:

Proceder a leitura com objetiva de imersão.Os cocos são geralmente gram-positivos, com exceção dos pertecentes aos gênero Neisseria (gonococo e meningococo), enquanto os bacilos são geralmente gram-negativos, com exceção dos pertencentes ao gênero Corynebacterium (bacilo diftérico), Bacillus (bacilo do carbúnculo) e Clostridium (bacilo do tétano). Está cloração é de grande valia no diagnóstico presuntivo das infecções bacterianas, especialmente aquelas que acometem sítios anatômicos normalmente estéreis (meningites, bacteremias). Outras utilidades extremamente importante é sua aplicação na avaliação da qualidade das amostras clínicas (escarro, feridas superficiais, urina).

• Visualização das bactérias sujeitas a esta coloração ao microscópio, é que estas têm um comportamento diferente face à coloração de Gram, o que permite classificá-las em:

Bactérias Gram-positivo (apresentam cor púrpura)

Bactérias Gram-negativo (apresentam cor vermelha)

Com os estudos de microscopia electrónica e análises bioquímicas conclui-se que a parede celular bacteriana é a estrutura responsável pelo diferente comportamento das bactérias à coloração de Gram.


As bactérias Gram-positivo apresentam uma parede espessa, homogénea, geralmente não estratificada e predominantemente constituída por peptidoglicano. Deste modo, o precipitado insolúvel que se forma por acção do mordente, fica retido no interior da célula pela camada espessa de peptidoglicano, logo, estas células não são descoradas permanecendo com a coloração conferida pelo corante primário (púrpura).

As bactérias Gram-negativo apresentam

uma parede estratificada constituída por uma membrana externa e por uma camada interna mais fina que contém peptidoglicano. Deste modo, o precipitado insolúvel, que se forma por acção do mordente, é removido (camada de peptidoglicano é mais fina que a das Gram-positivo e a membrana externa é parcial ou totalmente solubilizada pelo agente descolorante), pelo que as células ficam descoloradas, corando de vermelho pelo contrastante.

Obs: Lipopolissacarídeo (LPS); ele é o causador da febre quando a pessoa é gram-negativa

Diferença:

A diferente estrutura da parede bacteriana e principalmente a espessura da camada de peptidoglicano, é a responsável pelo diferente comportamento das bactérias face à coloração de Gram.

Característica do Peptidoglicano:

O peptidoglicano é um heteropolímero rígido e insolúvel na água, constituído por cadeias lineares de dois açúcares aminados
– NAG (ácido n-acetilglucosamina)
– NAM (ácido n-acetilmurâmico)
são ligados entre si por ligações glicosídicas. As cadeias lineares ligam-se entre si através de cadeias de quatro aminoácidos

Posted in: Microbiologia